Paket Lengkap Lisan Prethrombin-2 Insan Recombinan Dalampichia Pastoris Dan Meningkatkan Secara Optimal Kondisi Ekspresinya

Abstrak: Pretrombin merupakan prekursor dari trombin yang mempunyai acara proteolitik. Trombin merubah fibrinogen menjadi benang fibrin yang salah satu aplikasinya ialah sanggup dipakai sebagai lem untuk menggantikan teknik jahitan pasca bedah. Aplikasi trombin untuk pembuatan lem fibrin menuntut diproduksinya trombin rekombinan. Tujuan dari penelitian ini ialah lisan gen pretrombin-2 (PT2) insan rekombinan memakai sistem lisan Pichia pastoris. Gen pengode PT2 dirancang sesuai dengan kodon preferensi P. pastoris. Fragmen PT2 diamplifikasi dengan metoda PCR dengan penambahan sisi restriksi EcoR1 pada ujung 5’ dan sisi restriksi SacII pada ujung 3’. Produk PCR yang berukuran 924 pb diligasi dengan vektor lisan pPICZaB untuk P. pastoris dan disubkloning dalam inang Escherichia coli. Urutan nukleotida dikonfirmasi dengan metoda dideoxy Sanger. Plasmid rekombinan pPICZaB-PT2 kemudian dipakai untuk mentransformasi P. pastoris SMD1168 defisien protease dengan metoda elektroporasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa gen PT2 berhasil diamplifikasi dan dikloning dalam E. coli. Analisis restriksi dan penentuan urutan DNA menunjukkan bahwa PT2 rekombinan 100% homologi dengan hasil rancangan. Hasil lisan PT2 oleh P. pastoris memakai metanol sebagai inducer menunjukkan bahwa PT2 dengan berat molekul 35 kDa berhasil diekspresikan. Optimasi kondisi lisan melalui variasi konsentrasi metanol sebagai inducer dan sorbitol sebagai sumber karbon komplemen menunjukkan bahwa metanol 2% dan sorbitol 2% merupakan kondisi optimum lisan PT2.

Kata kunci: Pretrombin-2, trombin, Pichia pastoris, kondisi ekspresi

Penulis: Shabarni Gaffar, Purba Upay, Iman Permana Maksum, Khomaini Hasan, Toto Subroto, Sutarya Enus, Soetijoso Soemitro, Wulan Pertiwi

Kode Jurnal: jpfarmasidd170584